Análisis microbiológico de salmonella sp

julio 16, 2024

Salmonella sp

Placa de agar SS con colonias de salmonella

1. Preparación de la muestra (Día 1)

· Pesar 25 g, Añadir 225 ml de caldo lactosa y licuar 1 min de ser necesario.

· Transferir a un frasco estéril y déjelo reposar 60 ± 5 min a temperatura ambiente

· Ajuste el Ph a 6.8 +-2 con papel prueba

· Incubar por 24 h a 35°C.

2. Aislamiento (Día 2)

· Transfiera 1 ml de la mezcla a 10 ml de caldo de selenito cistina (SC) y otra mezcla de 1 ml a 10 ml de caldo TT.

· Incubar de 18 a 24 h a 35 °C.

Como alternativa, en sustitución del caldo tetrationato puede emplearse el medio Vassiliadis-Rappaport.

3. Aislamiento en medio selectivo (Día 3)

El BAM recomienda el aislamiento en tres medios selectivos; sin embargo, debido a la dificultad de contar con todos, se sugiere realizar el aislamiento en un único medio selectivo.

· Estriar en agar xilosa lisina desoxicolato (XLD), agar verde brillante (VB) y agar SS.

· Incubar las placas 24 ± 2 h a 35ºC.

4. Examinar colonias típicas salmonella sp. (Día 4)

· Agar xilosa lisina desoxicolato (XLD). Colonias rosadas con o sin centros negros. Muchos cultivos de Salmonella pueden producir colonias con centros negros grandes y brillantes o pueden aparecer como colonias casi completamente negras.

· Agar VB: colonias rojas o rosas que pueden ser transparentes rodeadas por medio enrojecido; las bacterias fermentadoras de la lactosa dan colonias amarillas.

· Agar SS: colonias translúcidas, ocasionalmente opacas. Algunas colonias dan centro negro. Las colonias fermentadoras de la lactosa son rojas.

Elija 2 o más colonias de Salmonella de cada placa de agar selectivo después de 24 ± 2 h de incubación y siembre.

5. Siembra en prueba bioquímica

· Incubar en tubos uno con agar triple azúcar hierro (TSI) y otro con agar hierro lisina (LIA), por estría en la superficie inclinada y por punción en el fondo.

· Incubar por 24 ± 2 h a 35ºC.

6. Confirmación (Día 5)

Observar el crecimiento en los tubos y considerar presuntivamente positivas para Salmonella las colonias que den las siguientes reacciones:

· Agar TSI, en el fondo del tubo se observa vire del indicador debido a la fermentación de la glucosa; en la superficie del medio se observa un color rojo más intenso que el medio original debido a la no fermentación de la lactosa ni de la sacarosa. En la mayoría de los casos se observa coloración negra a lo largo de la punción debido a la producción de ácido sulfihídrico.

· Agar LIA, se observa intensificación del color púrpura en todo el tubo por la descarboxilación de la lisina. Considerar negativos aquellos cultivos que produzcan claramente color amarillo en el fondo del agar. La mayoría de las cepas de Salmonella producen ácido sulfihídrico en este medio con ennegrecimiento a lo largo de la punción.

7. Referencias

BAM Capítulo 5: Salmonela | FDA

NOM-114-SSA1-1994 (salud.gob.mx)

Analisis_microbiologico_de_los_alimentos_Vol_I.pdf (anmat.gob.ar)

Manual de análisis microbiológico de alimentos (minsa.gob.pe)